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Dou SPTM 免疫组化双重染色步骤

发布时间:2013-3-18 10:49:22

Dou SPTM免疫组化双重染色试剂盒采用经亲和层析纯化并生物素化的二抗与链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶交联,利用不同酶催化不同底物产生不同颜色的沉淀物来特异地反应组织和细胞中不同抗原的存在状态。其染色步骤如下: 
1、石蜡切片脱蜡、水化,自来水冲洗; 
2、根据第一抗体的要求,对组织进行相应的抗原修复; 
3、除去PBS,切片上滴加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟。PBS冲洗3×3分钟; 
4、除去PBS,切片上滴加正常非免疫动物血清,室温下孵育10分钟; 
5、除去血清,切片上滴加第一抗体,室温下孵育60分钟。PBS冲洗3×3分钟; 
6、除去PBS,切片上滴加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
7、除去PBS,切片上滴加链霉菌抗生物素蛋白-碱性磷酸酶试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟。 
8、除去PBS,切片上滴加BCIP/NBT显色试剂显色,蒸馏水冲洗终止显色,PBS冲洗3×3分钟; 
9、除去PBS,切片上滴加双染增强试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
10、除去PBS,切片上滴加正常非免疫动物血清,室温下孵育10分钟; 
11、除去血清,切片上滴加另一个第一抗体,室温下孵育60分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
12、除去PBS,切片上滴加生物素标记的第二抗体,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
13、除去PBS,切片上滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3×3分钟; 
14、除去PBS,切片上滴加新鲜配制的AEC显色试剂显色; 
15、自来水冲洗终止显色,苏木素复染,PBS返蓝,水性封固剂封固。